UNITA’ DI PRODUZIONE DI PROTEINE E ANTICORPI

Group Leader: Alessandra Fucci (PhD)

Senior advisor: Maria Luisa Nolli (PhD)

Staff: Assunta Riccio (PhD)

         Egildo Luca D’Andrea (PhD)

         Simona Giacobbe (PhD)

         Ylenia Abruzzese (BSc)

Principali aree di attività 

I ricercatori dell’Unità hanno una consolidata esperienza nello sviluppo, nella produzione, nella purificazione e nella caratterizzazione di proteine ricombinanti, di anticorpi e di derivati anticorpali, nonché nella generazione di anticorpi monoclonali innovativi, mediante la tecnologia dell’ibridoma. 

Le attività includono anche: messa a punto e validazione di test immunoenzimatici; analisi dell’affinità e di cinetica di legame mediante SPR; sviluppo di protocolli per l’industrializzazione dei processi di produzione di biosimilari; produzione di enzimi ricombinanti.

Tecnologie principali

L’Unità dispone di molteplici ceppi e linee cellulari ed ha una vasta libreria di vettori di espressione, da impiegare nei processi produttivi di proteine e anticorpi.

L’utilizzo di strumenti e di tecnologie all’avanguardia e l’impiego di strategie su misura, disegnate ad hoc per ciascun progetto, consentono di operare ad alta efficienza e con un elevato grado di successo. Infine, l’accesso a metodi analitici avanzati, che includono SPR, HPLC e LC-MS/MS, consente di effettuare una caratterizzazione completa delle biomolecole prodotte.

Produzione e caratterizzazione di proteine ed anticorpi ricombinanti

• Sintesi genica, ottimizzazione dei codoni e generazione di vettori di espressione
• Test di espressione in E. coli, P. pastoris o Mammalian cells
• Ottimizzazione dell’espressione e messa a punto dei protocolli di purificazione
• Scale-up della produzione
• Analisi di quantità, purezza ed integrità (UV-Vis, SDS-PAGE, HPLC e Western Blot)
• Caratterizzazione biochimica (HPLC, LC-MS/MS) e studi di affinità (SPR)
• Dosaggio e rimozione dell’endotossina
• Marcatura/coniugazione

Sviluppo di anticorpi monoclonali e policlonali

• Definizione delle strategie di immunizzazione
• Design e produzione dell’antigene (opzionale)
• Immunizzazione (topi, ratti o conigli) ed esecuzione dei test di titolazione
• Generazione e screening di ibridomi (solo per la produzione di mAb)
• Stabilizzazione e banking degli ibridomi
• Purificazione degli anticorpi (0.1-100 mg)
• Caratterizzazione degli anticorpi (isotipizzazione, SDS-PAGE, ELISA, HPLC, SPR)

Sviluppo di saggi immunoenzimatici

• Selezione e pairing degli anticorpi
• Generazione della calibration curve per applicazioni quantitative
• Ottimizzazione, qualifica e validazione del saggio in diverse matrici
• Produzione e fornitura di kit custom
• Adeguamento di metodi ELISA già esistenti per l’uso in nuove applicazioni.